[生物-选修3：现代生物科技专题]

某同学采用基因工程技术在大肠杆菌中表达蛋白E。回答下列问题。

（1）该同学利用 $PCR$扩增目的基因。 $PCR$的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段，其中 $DNA$双链打开成为单链的阶段是________________，引物与模板 $DNA$链碱基之间的化学键是________。

（2）质粒载体上有限制酶a、b、c的酶切位点，限制酶的切割位点如图所示。构建重组质粒时，与用酶a单酶切相比，用酶a和酶b双酶切的优点体现在________（答出两点即可）；使用酶c单酶切构建重组质粒时宜选用的连接酶是________。

（3）将重组质粒转入大肠杆菌前，通常先将受体细胞处理成感受态，感受态细胞的特点是________；若要验证转化的大肠杆菌中含有重组质粒，简要的实验思路和预期结果是________________。

（4）蛋白E基因中的一段 $DNA$编码序列（与模板链互补）是 $GGGCCCAAGCTGAGATGA$，编码从 $GGG$开始，部分密码子见表。若第一个核苷酸G缺失，则突变后相应肽链的序列是________________________。